Downstream processing de vecteurs viraux
Les procédés de purification de vecteurs viraux se sont longtemps appuyés sur des systèmes utilisés pour la production d'anticorps monoclonaux, qui ne sont pas conçus pour assurer le niveau de récupération nécessaire.
L'arrivée de nouvelles technologies spécialement conçues pour les procédés upstream de production de vecteurs viraux pour la thérapie génique offre la possibilité d'augmenter le rendement et la capacité de production. Parmi les approches qui peuvent être mises à profit pour optimiser les procédés downstream concernant les vecteurs viraux, on peut citer les suivantes :
- Les opérations d'ultrafiltration/diafiltration, notamment par filtration à flux tangentiel, pour la récolte et la purification des cellules ou des virus, la concentration et la diafiltration des protéines en aval, ainsi que la formulation finale
- Les procédés de chromatographie intensifiés qui réduisent le nombre d'étapes ainsi que leurs dimensions, grâce à des technologies telles que les adsorbeurs à membrane chromatographique à haute productivité et à usage unique.
Ces technologies en aval offrent la possibilité de réduire les temps de purification des vecteurs viraux de plusieurs heures à quelques minutes, tout en améliorant la récupération. En outre, elles peuvent faciliter la transposition à l'échelle supérieure, réduire l'empreinte du procédé et permettre une utilisation plus efficace des installations.
Documentation technique apparentée
- /technical-documents/technical-article/pharmaceutical-and-biopharmaceutical-manufacturing/viral-vector-downstream-processing/scalable-tangential-flow-filtration-downstream-processing
- /technical-documents/technical-article/pharmaceutical-and-biopharmaceutical-manufacturing/gene-therapy-manufacturing/removing-dna-and-rna-using-benzonase-endonuclease-during-viral-production
- /technical-documents/technical-article/pharmaceutical-and-biopharmaceutical-manufacturing/gene-therapy-manufacturing/strategies-separation-analysis-empty-filled-capsids
- Shear ignorance? Think again: Breaking the perception of shear within viral vector manufacturing
La transcription de ce podcast traite des bonnes pratiques (et des idées fausses les plus courantes) lors de la définition des conditions d'un procédé et de l'utilisation de différents formats de systèmes de TFF.
- Pellicon® Capsules versus Hollow Fibers for Ultrafiltration/Diafiltration (UF/DF) in Viral Gene Therapy Manufacturing
Cette note d'application traite de la méthodologie et des résultats expérimentaux de l'évaluation des performances des capsules Pellicon® par rapport aux fibres creuses pour l'UF/DF des vecteurs viraux et décrit l'incidence de l'un ou l'autre type de filtre sur un procédé de TFF.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/352/641/pellicon-capsule-aav-ot11666en-ms.pdf
Faisant partie de la famille de filtres de TFF transposables de façon linéaire Pellicon®, les capsules Pellicon® à usage unique et les cassettes Pellicon® XL 50 pour la transposition à l'échelle inférieure garantissent fiabilité et reproductibilité à tous les stades de votre procédé d'AAV, depuis le développement jusqu'à la fabrication.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/987/212/pellicon-capsule-vgt-tb11669en-ms.pdf
Dans ce dossier technique, nous abordons l'utilisation de notre nouvelle technologie à usage unique pour la filtration à flux tangentiel (TFF) de vecteurs viraux au cours de l'évaluation de deux stratégies de contrôle du fonctionnement de la TFF.
- /deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/407/540/podcast-empty-full-separation-ot9653en-ms.pdf
Cet article explique la nécessité d'une compréhension plus nuancée de la capture des AAV et de la séparation des capsides vides et des capsides pleines, ainsi que les tendances qui stimulent l'innovation dans ce domaine.
Clarification primaire
Le milieu brut contenant les vecteurs viraux est filtré en profondeur ou par une combinaison de centrifugation et de filtration en profondeur afin d'éliminer les gros débris cellulaires et autres contaminants.
Clarification secondaire
Le milieu clarifié à l'issue de la clarification primaire est davantage purifié par le biais d'étapes supplémentaires.
Ultrafiltration/Diafiltration
L'ultrafiltration et la diafiltration sont utilisées respectivement pour la concentration et l'échange de tampons. Le vecteur viral est séparé des impuretés par une filtration basée sur la taille. La diafiltration élimine le sel et d'autres molécules et les remplace par le tampon de votre choix.
Chromatographie
Au moins deux méthodes de chromatographie sont utilisées pour purifier le vecteur viral, notamment l'échange d'ions, l'affinité et l'exclusion stérique.
Filtration de virus
Le vecteur viral purifié est soumis à une nanofiltration avec des pores de 15 nm afin d'éliminer les virus adventices, les endotoxines et toute autre impureté ou agrégat restant.
Filtration stérilisante
La filtration stérilisante, ou la réduction de la biocharge, peut être utilisée plusieurs fois dans le procédé. Le flux d'alimentation passe à travers un filtre de grade stérilisant de 0,4 ou 0,2 micron afin d'éliminer les bactéries et autres micro-organismes qui ont été introduits au cours du procédé.
Remplissage final
Le vecteur viral purifié et stérile est versé dans le contenant final prévu à cet effet. La formulation, les matériaux d'emballage et les conditions de stockage doivent être soigneusement étudiés afin de garantir la stabilité et l'intégrité du produit.
Workflow
Upstream processing de vecteurs viraux
Prendre les bonnes décisions pour les procédés en amont (upstream processing) se répercute non seulement sur le titre en vecteur viral, mais aussi sur les procédés en aval (downstream processing), les délais et l'homologation
Formulation de vecteurs viraux et remplissage final
La formulation d'une thérapie génique commercialement viable nécessite un haut niveau d'expertise en matière d'applications et de règlementation
Caractérisation de vecteurs viraux et contrôles de biosécurité
La caractérisation des vecteurs viraux et les contrôles de biosécurité essentiels permettent d'effectuer une analyse complète des principaux attributs de qualité : identité, puissance, sécurité et stabilité
Développement et fabrication en sous-traitance de vecteurs viraux
Les partenariats noués avec les CDMO jouent un rôle clé dans la progression des pipelines cliniques et la réussite des mises sur le marché
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