D4263
Desossiribonucleasi I
Standardized vial containing 2,000 Kunitz units of DNase I (D4527), vial of ≥0.25 mg total protein
Sinonimo/i:
DNasi I, Desossi-ribonucleato 5′-oligonucleotido-idrolasi
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About This Item
Prodotti consigliati
Origine biologica
bovine pancreas
Forma fisica
powder
Attività specifica
1700—2300 U/vial
PM
~31 kDa
Purificato mediante
chromatography
Confezionamento
vial of ≥0.25 mg total protein
tecniche
DNA extraction: suitable
Solubilità
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
Compatibilità
suitable for molecular biology
applicazioni
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
Temperatura di conservazione
−20°C
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Applicazioni
La DNasi I è usata per incidere il DNA come primo passaggio per incorporarvi basi marcate. La DNasi I di Sigma è stata usata insieme ad altri enzimi per la raccolta e la dissociazione del tumore, durante l′isolamento e la caratterizzazione molecolare di cellule staminali tumorali in tumori della mammella murini MMTV-Wnt-1.
La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata in uno studio per stabilire che le desossiribonucleasi I di mammifero sono state classificate in tre tipi sulla base delle differenze nelle loro concentrazioni tissutali. La desossiribonucleasi I da pancreas bovino è stata usata anche in uno studio per confrontare le tre strutture primarie della desossiribonucleasi isolata da pancreas bovino, ovino e suino.
Usato per rimuovere DNA da campioni di proteine.
Azioni biochim/fisiol
La DNasi I è un′endonucleasi che agisce sui legami fosfodiesterici adiacenti a pirimidine per produrre polinucleotidi con 5′ fosfati terminali. In presenza di Mg2+, la DNasi I scinde ciascun filamento di DNA indipendentemente e i siti di clivaggio sono casuali. Entrambi i filamenti di DNA sono scissi approssimativamente nello stesso sito in presenza di Mn2+. Si è trovato che il pH ottimale è fra 7 e 8. Cationi bivalenti come Mn2+, Ca2+, Co2+, e Zn2+ sono attivatori dell′enzima. Una concentrazione di Ca2+ 5 mM stabilizza l′enzima nei confronti della digestione proteolitica. La DNasi I da pancreas bovino è costituita da quattro componenti, A, B, C, e D, distinguibili per via cromatografica con rapporti molari rispettivamente 4:1:1. Si trovano solo piccole quantità di D. 2-Mercaptoetanolo, chelanti, sodio dodecil solfato (SDS) e actina sono noti inibitori dell′attività enzimatica.
Caratteristiche e vantaggi
Rimozione efficiente del DNA: la desossiribonucleasi I ottenuta da pancreas bovino è una efficace endonucleasi che taglia entrambi i filamenti di DNA in modo casuale, rendendola una scelta adatta per la rimozione del DNA dai campioni di proteine.
Applicazioni versatili: questo enzima può servire a creare interruzioni (nick) lungo il DNA, incorporare basi marcate nel DNA e isolare e caratterizzare a livello molecolare le cellule staminali neoplastiche nei tumori mammari murini. È utile anche negli studi comparativi sulla desossiribonucleasi isolata da pancreas bovino, ovino e porcino.
Stabile: questo enzima rimane attivo fino a un massimo di 5 ore a 60 °C, a pH compreso tra 5 e 7, e può essere conservato per un massimo di una settimana a −20 °C con minima perdita di attività. La sua stabilità lo rende un'opzione pratica ed economicamente vantaggiosa.
Applicazioni versatili: questo enzima può servire a creare interruzioni (nick) lungo il DNA, incorporare basi marcate nel DNA e isolare e caratterizzare a livello molecolare le cellule staminali neoplastiche nei tumori mammari murini. È utile anche negli studi comparativi sulla desossiribonucleasi isolata da pancreas bovino, ovino e porcino.
Stabile: questo enzima rimane attivo fino a un massimo di 5 ore a 60 °C, a pH compreso tra 5 e 7, e può essere conservato per un massimo di una settimana a −20 °C con minima perdita di attività. La sua stabilità lo rende un'opzione pratica ed economicamente vantaggiosa.
Definizione di unità
Una unità Kunitz produrrà un ΔA260 di 0,001 per minuto per mL a pH 5,0 a 25 °C, usando DNA tipo I o III come substrato.
Nota sulla preparazione
L′enzima in polvere può essere ricostituito in acqua o in qualunque tampone a pH compreso tra 4,0 e 9,0, fatta eccezione per il tampone fosfato. Evitare i chelanti del calcio. La soluzione di DNasi I 10 mg/mL in NaCl 0,15 M può perdere <10% della sua attività se conservata per una settimana in aliquote a −20 °C. Le stesse soluzioni conservate in aliquote a 2-8 °C possono perdere circa il 20% dell′attività. Rimane attiva fino a cinque ore a 60 °C a pH fra 5 e 7 e perde attività in <10 minuti a 68 °C. L′attività decade del 6%/ora in tampone acetato (a pH 5,0) e tris (a pH 7,2) alla concentrazione di 1 mg/mL.
Risultati analitici
Proteina determinata con il biureto.
Inibitore
N° Catalogo
Descrizione
Determinazione del prezzo
Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Resp. Sens. 1
Codice della classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 3
Punto d’infiammabilità (°F)
Not applicable
Punto d’infiammabilità (°C)
Not applicable
Dispositivi di protezione individuale
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
Certificati d'analisi (COA)
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To standardize a procedure for the enzymatic assay of Deoxyribonuclease I.
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