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  • The effect of thermodynamic properties of solvent mixtures explains the difference between methanol and ethanol in C.antarctica lipase B catalyzed alcoholysis.

The effect of thermodynamic properties of solvent mixtures explains the difference between methanol and ethanol in C.antarctica lipase B catalyzed alcoholysis.

Journal of biotechnology (2015-09-02)
Francesco Sasso, Tobias Kulschewski, Francesco Secundo, Marina Lotti, Jürgen Pleiss
RÉSUMÉ

Kinetic modelling, molecular modelling, and experimental determination of the initial reaction velocity of lipase-catalyzed alcoholysis were combined to study the effect of the alcohol substrate to catalytic activity. The model system consisted of methanol or ethanol at varying concentrations, vinyl acetate as ester substrate 15.2% (v/v), toluene as organic solvent, water at a controlled thermodynamic activity of 0.09, and C. antarctica lipase B as enzyme. For both alcohol substrates, the initial reaction velocity increased sharply at low concentrations and reached a maximum at 0.7% (v/v) for methanol and 2% (v/v) for ethanol. For higher concentrations, the reaction rate decreased to a level of 74% and 60% of the peak value, respectively, due to substrate inhibition. The concentration dependency was described by a kinetic model, including a ping-pong bi-bi mechanism and competitive inhibition by the alcohol, and confirmed previous observations that methanol is more efficiently inhibiting the enzyme than ethanol. However, if the initial reaction velocity was expressed in terms of thermodynamic activity of the two alcohol substrates, the maximum of initial reaction velocity was similar for methanol (a MeOH(max)=0.19) and ethanol (a EtOH(max)=0.21). This was confirmed by molecular modelling which resulted in similar KM (0.22 and 0.19) and Ki values (0.44 and 0.49) for methanol and ethanol, respectively, if expressed in thermodynamic activities. Thus, the experimentally observed difference between methanol and ethanol is not due to differences in interaction with the enzyme but is a consequence of the thermodynamics of the substrate-solvent mixture. For low concentrations in toluene, the activity coefficient of methanol is 40% higher than the activity coefficient of ethanol (γ MeOH=8.5, γ EtOH=6.1).

MATÉRIAUX
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Sigma-Aldrich
Ethyl alcohol, Pure, 190 proof, for molecular biology
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Sigma-Aldrich
Méthanol, ACS reagent, ≥99.8%
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Sigma-Aldrich
Ethyl alcohol, Pure, 200 proof, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Acétate d'éthyle, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Toluène, ACS reagent, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Lithium chloride, ACS reagent, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Ethyl alcohol, Pure, 200 proof, meets USP testing specifications
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Sigma-Aldrich
Méthanol, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.8% (GC)
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Sigma-Aldrich
Toluène, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.7% (GC)
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Sigma-Aldrich
Méthanol, Laboratory Reagent, ≥99.6%
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Sigma-Aldrich
Lithium chloride, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ReagentPlus®, 99%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Acétate d'éthyle, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Éthanol, ACS reagent, prima fine spirit, without additive, F15 o1
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Sigma-Aldrich
Vinyl acetate, contains 3-20 ppm hydroquinone as inhibitor, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Éthanol, purum, absolute ethanol, denaturated with 4.8% isopropanol, A15 IPA1, ≥99.8% (based on denaturant-free substance)
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Lithium chloride, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Lithium chloride, for molecular biology, ≥99%
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Disponibilité
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Sigma-Aldrich
Lithium chloride, ReagentPlus®, 99%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Méthanol, ACS spectrophotometric grade, ≥99.9%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Lithium chloride, powder, ≥99.98% trace metals basis
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Lithium chloride solution, 8 M, for molecular biology, ≥99%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Méthanol, ACS reagent, ≥99.8%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Méthanol, BioReagent, ≥99.93%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Méthanol, Absolute - Acetone free
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Prix
Quantité
Supelco
Vinyl acetate, analytical standard
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Toluène, ACS reagent, ≥99.5%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Toluène, Laboratory Reagent, ≥99.3%
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Quantité
Sigma-Aldrich
Ethyl alcohol, Pure, 190 proof, ACS spectrophotometric grade, 95.0%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Méthanol, ACS reagent, ≥99.8%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Toluène, anhydrous, 99.8%
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