Protocole de coating de fibronectine

Rappels importants avant de commencer

1. Veiller à ce que les cellules soient saines et en nombre suffisant.
2. Les produits de fibronectine commercialisés sous forme de solutions se conservent au moins un an entre 2 °C et 8 °C s'ils sont maintenus stériles.
3. Les produits de fibronectine commercialisés sous forme de poudres lyophilisées doivent être reconstitués dans un solvant approprié. Dissoudre le produit pendant au moins 30 minutes à 37 °C. Il peut subsister une petite quantité de matière non dissoute qui n'a aucune incidence sur les performances du produit. La solution de fibronectine ainsi reconstituée peut être conservée en aliquotes de travail, à -20 °C ou moins.
4. Éviter la centrifugation ou l'agitation excessive des solutions de fibronectine.
5. Les supports de culture recouverts de fibronectine se conservent pendant 2 à 4 semaines entre 2 °C et 8 °C dans un récipient stérile fermé ou des sacs stériles refermables.
6. La concentration de la couche de surface peut varier en fonction du type de cellules cultivées. Nous vous recommandons d'optimiser votre protocole afin de déterminer la concentration de coating réellement adaptée à vos cellules. Le Tableau 1 recense les concentrations recommandées.
7. Ne pas trop sécher les plaques de culture et les lamelles couvre-objets recouvertes de fibronectine, au risque d'empêcher l'adhésion des cellules.
8. Toutes les étapes du protocole doivent être réalisées en conditions stériles.

Protocole de coating de fibronectine sur supports de culture

1. Diluer la fibronectine à la concentration souhaitée. Les conditions d'adhésion optimales dépendent du type de cellules et de l'application. La concentration de coating standard varie de 1 à 5 µg/cm².
2. Recouvrir la surface de culture avec le plus petit volume de solution possible.
3. Une fois la surface entièrement recouverte, retirer le surplus de solution. Il pourra servir à recouvrir un autre puits ou une autre plaque.
4. Laisser sécher à l'air libre pendant au moins 45 minutes à température ambiante avant d'introduire les cellules et le milieu.

Tableau 1. Fibronectines permettant l'adhésion cellulaire

Réf. produit	Description	Concentration de coating	Milieu de dilution
10838039001	Fibronectine plasmatique humaine	5 µg/cm2	Eau stérile
FIBRP-RO	Fibronectine (pure)	5 µg/cm2	Eau stérile
F0556	Solution de fibronectine de fibroblastes humains	1 à 5 μg/cm2	HBSS stérile
F0635	Fibronectine plasmatique murine	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile
F0895	Fibronectine plasmatique humaine	1 à 5 μg/cm2	Solution saline équilibrée stérile
F1056	Fibronectine plasmatique humaine	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile
F1141	Fibronectine plasmatique bovine	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile
F2006	Fibronectine plasmatique humaine	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile
F2518	Fibronectine de fibroblastes de prépuce humain	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile
F4759	Fibronectine plasmatique bovine	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile
FC010	Fibronectine plasmatique humaine, protéine purifiée	2 à 10 μg/cm2	Solution saline équilibrée stérile
FC014	Fibronectine bovine	2 à 10 μg/cm2	Solution saline équilibrée stérile
S5171	Superfibronectine plasmatique humaine	1 μg/cm2	PBS stérile
ECM001	Fibronectine humaine recombinante exprimée dans des cellules HEK	1 à 5 μg/cm2	Eau stérile

Fragments protéolytiques de fibronectine

Des fragments de fibronectine sont obtenus par l'action d'enzymes protéolytiques sur de la fibronectine plasmatique. Ils permettent de cartographier, sur la molécule de fibronectine, les régions responsables de l'adhérence spécifique au collagène ainsi que d'autres fonctions biologiquement intéressantes.

Tableau 2. Fragments de fibronectine permettant d'étudier l'adhésion cellulaire

Réf. produit	Description	Activité de liaison
F9911	Fragment protéolytique de la fibronectine plasmatique humaine, 30 kDa	Fragment de liaison à l'héparine
F0162	Fragment protéolytique de la fibronectine plasmatique humaine, 45 kDa	Fragment de liaison à la gélatine
F0287	Fragment protéolytique de la fibronectine plasmatique humaine, 70 kDa	Fragment de liaison à l'héparine et à la gélatine
F3542	Fragment III1-C de la fibronectine humaine	Fragment de liaison à la fibronectine (auto-assemblage)
F1903	Fragment α-chymotrypsique (région de liaison à l'héparine) de fibronectine humaine purifié, 40 kDa	Fragment de liaison à l'héparine
F1904	Fragment α-chymotrypsique (région d'adhésion cellulaire) de fibronectine humaine purifié, 120 kDa	Région d'adhésion cellulaire de la fibronectine

Foire aux questions (FAQ)

1. Quelle est la pureté de vos produits de fibronectine ?

Nous ne déterminons pas la pureté de nos solutions de fibronectine. Pour garantir une qualité constante, nous réalisons une électrophorèse SDS-PAGE et comparons une bande de fibronectine principale (120 kDa) à celle des lots précédents. Toutes nos poudres de fibronectine sont pures à 95 % ou plus.

2. Quel est le meilleur solvant pour diluer la fibronectine ?

Les solvants compatibles sont indiqués dans le Tableau 1.

3. Quelle est la durée de conservation de la fibronectine ?

Les produits de fibronectine commercialisés sous forme de solutions se conservent pendant un an entre 2 °C et 8 °C s'ils sont maintenus stériles. Après dilution, toute fibronectine non utilisée se conserve pendant une semaine entre 2 °C et 8 °C. Les plaques recouvertes de fibronectine se conservent 4 semaines entre 2 °C et 8 °C, à condition d'être correctement scellées afin d'éviter la contamination et/ou le dessèchement de la fibronectine. Ne pas utiliser le produit en cas de décoloration ou de fissuration de la surface du matériau à recouvrir.

4. Quelle est la concentration de fibronectine optimale pour un coating ?

Le Tableau 1 indique les concentrations de coating recommandées pour nos fibronectines. Nous vous conseillons cependant d'optimiser ces concentrations en fonction de vos propres cellules.

5. Quelle est la meilleure protéine de matrice extracellulaire pour l'étude de la différenciation des cellules souches ?

Bien que la laminine et la fibronectine soient très utilisées, la protéine de matrice extracellulaire dont votre cellule a besoin doit être déterminée par des tests expérimentaux. Les cellules souches expriment diverses intégrines à leur surface au cours des différents stades de leur différenciation. La protéine de matrice extracellulaire choisie dépendra du stade de différenciation à étudier.