CSA001
Ensaio de atividade da quinase associada a Rho (ROCK)
This Rho-associated Protein Kinase (ROCK) Activity Assay Kit is an enzyme immunoassay for detection of the active ROCK & DMPK family kinases.
Faça loginpara ver os preços organizacionais e de contrato
About This Item
Código UNSPSC:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32
Produtos recomendados
reatividade da espécie (prevista por homologia)
all
fabricante/nome comercial
Chemicon®
técnica(s)
activity assay: suitable
método de detecção
colorimetric
Condições de expedição
ambient
Descrição geral
Introdução:
As pequenas proteínas GTPase da família Rho são reguladores essenciais de vários aspectos do comportamento celular, como motilidade, proliferação e apoptose. Elas têm uma função central em muitas respostas móveis que envolvem o citoesqueleto de actina e/ou a rede de microtúbulos, desde a extensão de neurites até a fagocitose e a invasão de células cancerígenas. Além disso, elas contribuem para mudanças na expressão gênica que levam à progressão do ciclo celular ou a respostas de células diferenciadas. A Rho é ativada por sinais extracelulares, como o ácido lisofosfatídico (LPA). As ações da Rho são mediadas por efetores Rho a jusante. Um desses efetores é a proteína quinase associada à Rho (ROCK). Foram identificadas duas isoformas de ROCK: ROCK-I (também conhecida como ROKβ) e ROCK-II (também conhecida como Rho Kinase e ROKα). A ROCK medeia a sinalização Rho e reorganiza o citoesqueleto de actina por meio da fosforilação de vários substratos que contribuem para a montagem dos filamentos de actina e para a contratilidade.
A ROCK inativa a fosfatase de miosina por meio da fosforilação específica da subunidade alvo 1 da fosfatase de miosina (MYPT1) no resíduo de treonina 696, o que resulta em um aumento na forma fosforilada da cadeia leve de miosina de 20 kDa (MLC20). Esse resíduo de treonina também pode ser fosforilado pelas quinases da família da proteína quinase da distrofia miotônica (DMPK).
Princípio do teste:
O kit de ensaio de atividade da proteína quinase associada a Rho (ROCK) da ’Millipore é um imunoensaio enzimático para detecção das quinases ativas da família ROCK e DMPK. As placas são pré-revestidas com MYPT1 recombinante, que contém um resíduo Thr696 que pode ser fosforilado com a adição de ROCK-I, ROCK-II ou DMPK. Em seguida, é aplicado um anticorpo de detecção que detecta especificamente apenas MYPT1 fosforilado em Thr696. Em seguida, é adicionado um anticorpo secundário de detecção conjugado com HRP. A quantidade de substrato fosforilado é medida pela adição do substrato cromogênico tetra-metilbenzidina (TMB), que a HRP ligada converte de uma solução incolor para uma solução azul (ou amarela após a adição da solução de parada). O sinal de absorbância em 450 nm reflete a quantidade relativa de atividade ROCK na amostra.
O kit de ensaio ROCK foi projetado para determinar a presença e a quantidade relativa de atividade ROCK purificada, bem como para a triagem de inibidores ou ativadores de quinases da família ROCK ou DMPK.
As pequenas proteínas GTPase da família Rho são reguladores essenciais de vários aspectos do comportamento celular, como motilidade, proliferação e apoptose. Elas têm uma função central em muitas respostas móveis que envolvem o citoesqueleto de actina e/ou a rede de microtúbulos, desde a extensão de neurites até a fagocitose e a invasão de células cancerígenas. Além disso, elas contribuem para mudanças na expressão gênica que levam à progressão do ciclo celular ou a respostas de células diferenciadas. A Rho é ativada por sinais extracelulares, como o ácido lisofosfatídico (LPA). As ações da Rho são mediadas por efetores Rho a jusante. Um desses efetores é a proteína quinase associada à Rho (ROCK). Foram identificadas duas isoformas de ROCK: ROCK-I (também conhecida como ROKβ) e ROCK-II (também conhecida como Rho Kinase e ROKα). A ROCK medeia a sinalização Rho e reorganiza o citoesqueleto de actina por meio da fosforilação de vários substratos que contribuem para a montagem dos filamentos de actina e para a contratilidade.
A ROCK inativa a fosfatase de miosina por meio da fosforilação específica da subunidade alvo 1 da fosfatase de miosina (MYPT1) no resíduo de treonina 696, o que resulta em um aumento na forma fosforilada da cadeia leve de miosina de 20 kDa (MLC20). Esse resíduo de treonina também pode ser fosforilado pelas quinases da família da proteína quinase da distrofia miotônica (DMPK).
Princípio do teste:
O kit de ensaio de atividade da proteína quinase associada a Rho (ROCK) da ’Millipore é um imunoensaio enzimático para detecção das quinases ativas da família ROCK e DMPK. As placas são pré-revestidas com MYPT1 recombinante, que contém um resíduo Thr696 que pode ser fosforilado com a adição de ROCK-I, ROCK-II ou DMPK. Em seguida, é aplicado um anticorpo de detecção que detecta especificamente apenas MYPT1 fosforilado em Thr696. Em seguida, é adicionado um anticorpo secundário de detecção conjugado com HRP. A quantidade de substrato fosforilado é medida pela adição do substrato cromogênico tetra-metilbenzidina (TMB), que a HRP ligada converte de uma solução incolor para uma solução azul (ou amarela após a adição da solução de parada). O sinal de absorbância em 450 nm reflete a quantidade relativa de atividade ROCK na amostra.
O kit de ensaio ROCK foi projetado para determinar a presença e a quantidade relativa de atividade ROCK purificada, bem como para a triagem de inibidores ou ativadores de quinases da família ROCK ou DMPK.
Aplicação
O kit de ensaio de atividade da proteína quinase associada a Rho (ROCK) ’da Millipore é um imunoensaio enzimático para detecção das quinases ativas da família ROCK e DMPK. As placas são pré-revestidas com MYPT1 recombinante, que contém um resíduo Thr696 que pode ser fosforilado com a adição de ROCK-I, ROCK-II ou DMPK. Em seguida, é aplicado um anticorpo de detecção que detecta especificamente apenas MYPT1 fosforilado em Thr696. Em seguida, é adicionado um anticorpo secundário de detecção conjugado com HRP. A quantidade de substrato fosforilado é medida pela adição do substrato cromogênico tetra-metilbenzidina (TMB), que a HRP ligada converte de uma solução incolor para uma solução azul (ou amarela após a adição da solução de parada). O sinal de absorbância em 450 nm reflete a quantidade relativa de atividade ROCK na amostra.
O kit de ensaio ROCK foi projetado para determinar a presença e a quantidade relativa de atividade ROCK purificada, bem como para a triagem de inibidores ou ativadores de quinases da família ROCK ou DMPK. Ele também pode ser usado para avaliar a potência de agentes farmacológicos nas quinases da família ROCK ou DMPK.
O kit de ensaio ROCK foi projetado para determinar a presença e a quantidade relativa de atividade ROCK purificada, bem como para a triagem de inibidores ou ativadores de quinases da família ROCK ou DMPK. Ele também pode ser usado para avaliar a potência de agentes farmacológicos nas quinases da família ROCK ou DMPK.
Componentes
Placa multiestrato de 96 cavidades pré-revestida com MYPT1: Uma placa de 96 cavidades pré-revestida com o anticorpo MYPT1
Anti-phospho-MYPT1(Thr696): Um frasco com 10 µg de anticorpo antiphospho-MYPT1(Thr696)
TMB/Substrato E: Um frasco contendo 12 ml de
Stop Solution: Um frasco contendo 12 ml
TBS, 20X: Um frasco contendo 50 ml de 20X TBS
20% Tween® 20 (v/v): Um frasco contendo 3 ml de
selantes de placa: Duas tampas de placa
Tampão de diluição de ensaio I: Um frasco contendo 1 ml
ATP (10 mM): Um frasco contendo 50 µl
MgCl2 (1M): Um frasco contendo 100 µl de
BSA 30%: Um frasco contendo 1 ml
de anticorpo secundário HRP IgG anti-coelho de cabra: Um frasco contendo 30 µl
do inibidor de ROCK Y-27632: Um frasco contendo 150 µl
de quinase II associada a Rho ativa (ROCK-II): Um frasco contendo 10 µg
Anti-phospho-MYPT1(Thr696): Um frasco com 10 µg de anticorpo antiphospho-MYPT1(Thr696)
TMB/Substrato E: Um frasco contendo 12 ml de
Stop Solution: Um frasco contendo 12 ml
TBS, 20X: Um frasco contendo 50 ml de 20X TBS
20% Tween® 20 (v/v): Um frasco contendo 3 ml de
selantes de placa: Duas tampas de placa
Tampão de diluição de ensaio I: Um frasco contendo 1 ml
ATP (10 mM): Um frasco contendo 50 µl
MgCl2 (1M): Um frasco contendo 100 µl de
BSA 30%: Um frasco contendo 1 ml
de anticorpo secundário HRP IgG anti-coelho de cabra: Um frasco contendo 30 µl
do inibidor de ROCK Y-27632: Um frasco contendo 150 µl
de quinase II associada a Rho ativa (ROCK-II): Um frasco contendo 10 µg
Armazenamento e estabilidade
Armazene os materiais do kit nas temperaturas especificadas no rótulo e no manual; use dentro de 4 meses a partir da data de recebimento.
Informações legais
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC
Palavra indicadora
Warning
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Met. Corr. 1 - Skin Sens. 1
Código de classe de armazenamento
8A - Combustible corrosive hazardous materials
Certificados de análise (COA)
Busque Certificados de análise (COA) digitando o Número do Lote do produto. Os números de lote e remessa podem ser encontrados no rótulo de um produto após a palavra “Lot” ou “Batch”.
Já possui este produto?
Encontre a documentação dos produtos que você adquiriu recentemente na biblioteca de documentos.
Karolien Hollanders et al.
Current eye research, 42(2), 260-272 (2016-07-12)
Diabetic retinopathy (DR) is characterized by an early stage of inflammation and vessel leakage, and an advanced vasoproliferative stage. Also, neurodegeneration might play an important role in disease pathogenesis. The aim of this study was to investigate the effect of
Taslim A Al-Hilal et al.
Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 334, 237-247 (2021-04-30)
ROCK, one of the downstream regulators of Rho, controls actomyosin cytoskeleton organization, stress fiber formation, smooth muscle contraction, and cell migration. ROCK plays an important role in the pathologies of cerebral and coronary vasospasm, hypertension, cancer, and arteriosclerosis. Pharmacological-induced systemic
Paolo Armando Gagliardi et al.
The Journal of cell biology, 206(3), 415-434 (2014-08-06)
Directional cell migration is of paramount importance in both physiological and pathological processes, such as development, wound healing, immune response, and cancer invasion. Here, we report that 3-phosphoinositide-dependent kinase 1 (PDK1) regulates epithelial directional migration and invasion by binding and
Joseph Jude et al.
American journal of respiratory cell and molecular biology, 55(4), 542-553 (2016-05-06)
Formaldehyde, a common indoor air pollutant, exacerbates asthma and synergizes with allergen to induce airway hyperresponsiveness (AHR) in animal models. The mechanisms mediating formaldehyde-induced AHR remain poorly understood. We posit that formaldehyde modulates agonist-induced contractile response of human airway smooth
Aurelie Nguyen Dinh Cat et al.
Scientific reports, 8(1), 2952-2952 (2018-02-15)
Activation of aldosterone/mineralocorticoid receptors (MR) has been implicated in vascular dysfunction of diabetes. Underlying mechanisms are elusive. Therefore, we investigated the role of Rho kinase (ROCK) in aldosterone/MR signaling and vascular dysfunction in a model of diabetes. Diabetic obese mice
Nossa equipe de cientistas tem experiência em todas as áreas de pesquisa, incluindo Life Sciences, ciência de materiais, síntese química, cromatografia, química analítica e muitas outras.
Entre em contato com a assistência técnica