Oligomères sur mesure ;iScale™

• ADN
• Caractéristiques des oligomères d'ADN iScale
• pARNi
• Caractéristiques des oligomères de pARNi iScale
• Utilisation démontrée in vivo
• Produits apparentés
• Références

Les oligomères d'ADN et de pARNi iScale sont des milligrammes ou des grammes d'oligonucléotides d'ADN et de pARNi fabriqués sur mesure pour répondre à des besoins spécifiques.

ADN

 

 

Les quantités d'oligomères d'ADN sur mesure exprimées en milligrammes ou en grammes sont destinées à des projets in vivo, des projets à haut débit et des projets commerciaux (outils de recherche en sciences de la vie, diagnostics moléculaires et tests développés en laboratoire). Pour des quantités "iScale" d'adaptateurs pour le séquençage de dernière génération, voir notre produit Next-Gen Sequencing Oligos.

Avantages du produit

• Quantités disponibles pour répondre à vos besoins expérimentaux et commerciaux
• Consultation de notre équipe scientifique pour définir les spécifications de votre application
• Laboratoire d'analyses ultramoderne pour des produits de haute qualité

Caractéristiques du produit

Pour toute précision (mentions "nous consulter") ou tout besoin différent des spécifications générales indiquées, veuillez nous écrire à dnaoligos@milliporesigma.com.

Caractéristiques des oligomères d'ADN iScale

Quantités	10, 25, 50, 100, 250 et 500 mg  1, 2, 5, 10 et 15 g (nous consulter pour des quantités plus importantes)
Purification	Dessalage, RP-HPLC et purification in vivo
Longueur des séquences	10 à 55 bases (nous consulter pour des longueurs plus importantes)
Modifications	6-FAM™, biotine, phosphate, amino-modificateurs et autres  Acides nucléiques bloqués disponibles  Nous consulter pour la faisabilité de l'incorporation d'acides nucléiques bloqués ou d'autres modifications
Contrôle qualité	100 % par spectrométrie de masse  HPLC analytique disponible   Certificat d'analyse disponible
Format	Produit fourni sous forme sèche ou en solution dans des tubes ou des plaques  Mélange, aliquotage et normalisation disponibles (nous consulter pour la faisabilité)
Services	Échange de sels : remplace les ions ammonium toxiques issus de la synthèse par des ions sodium physiologiquement tolérables. Inclus pour tout type de purification.    Filtration : réduit au minimum la quantité de bactéries, de moisissures et d'autres contaminants. Inclus pour la purification in vivo.    Recherche d'endotoxines : vérifie que la quantité de lipopolysaccharides de bactéries à Gram négatif est inférieure à un seuil acceptable, au risque que l'hôte succombe à un choc toxique déclenché par une cascade de réactions immunitaires. Disponible pour la purification in vivo.

Applications utiles

• ADN antisens
• Tests de capture
• PCR/qPCR à haut débit
• Méthode de Sanger et séquençage de dernière génération (NGS) (hors adaptateurs)
• Détermination de la structure cristallographique par rayons X
• Étude du pouvoir immunostimulant
• Production de puces à ADN

Assurance qualité

Nos procédés de fabrication reposent sur un système de management de la qualité (QMS) robuste qui garantit le respect des normes de qualité suivantes :

• ISO 9001:2015 pour la fabrication d'oligonucléotides de qualité recherche
• ISO 13485:2016 pour la fabrication d'oligonucléotides de qualité diagnostic
• ISO 14001:2015 pour un management environnemental efficace

Cette culture de la qualité est au cœur de toutes nos activités. Voici les principales caractéristiques de notre QMS :

• Certificats d'analyse
• Contrôle documentaire
• Notification des changements
• Gestion des fournisseurs
• Accords commerciaux
• Actions correctives et préventives

Chacune de ces caractéristiques est un maillon important de l'assurance qualité. Pour le contrôle, nous nous soumettons régulièrement à des audits rigoureux, qu'ils soient menés en interne, par nos clients ou par des organismes certificateurs.

pARNi

Les milligrammes et grammes de pARNi MISSION de qualité in vivo conviennent mieux aux recherches sur l'ARNi chez l'animal. Nous fabriquons également d'autres types d'ARN, notamment des micro-ARN et des ARN simple brin.

Avantages du produit

• Adapté aux applications in vivo, dont la validation des cibles et les essais précliniques
• Disponible pour les pARNi MISSION préconçus ou vos séquences de pARNi sur mesure
• Livrable directement ou en tant qu'élément essentiel de votre stratégie de formulation

Caractéristiques du produit

Pour toute précision (mentions "nous consulter") ou tout besoin différent des spécifications générales indiquées, veuillez nous écrire à sirnarequest@milliporesigma.com.

Caractéristiques des oligomères de pARNi iScale

Quantités	• 3, 50 et 100 mg • Nous consulter pour des quantités plus importantes
Purification	• Dessalage, RP-HPLC et purification in vivo
Forme des séquences	• 19 à 50-mères simple brin ou double brin
Modifications	• Biotine, phosphate, amino-modificateur (C3, C6, C6 dT, C7, C12), 6-FAM™, cyanine 3, cyanine 5, cyanine 5.5, 2'-OMe et phosphorothioate • Acides nucléiques bloqués disponibles dans tous les pays en dehors des États-Unis • Nous consulter pour la faisabilité de l'incorporation d'acides nucléiques bloqués ou d'autres modifications
Contrôle qualité	• 100 % par spectrométrie de masse* • HPLC analytique disponible • Certificat d'analyse disponible
Format	• Produit fourni sous forme sèche dans des tubes ou des plaques • Mélange et aliquotage disponibles (nous consulter pour la faisabilité)
Services	• Si l'oligonucléotide est destiné à une application in vivo ou une purification de qualité in vivo, les services suivants sont recommandés :   - Échange de sels (remplace les ions ammonium toxiques issus de la synthèse par des ions sodium physiologiquement tolérables) - Filtration (réduit au minimum la quantité de bactéries, de moisissures et d'autres contaminants) - Recherche d'endotoxines (vérifie que la quantité de lipopolysaccharides de bactéries à Gram négatif est inférieure à un seuil acceptable, au risque que l'hôte succombe à un choc toxique déclenché par une cascade de réactions immunitaires)

* Selon le site de fabrication, une électrophorèse PAGE peut être utilisée pour contrôler les pARNi double brin.

Utilisation démontrée in vivo

Nous avons collaboré avec Bioo Scientific (aujourd'hui PerkinElmer) pour valider notre pARNi MISSION de qualité in vivo (voir l'article paru dans Drug Discovery & Development le 1^er août 2008).

Pour ces expériences, nous avons injecté des cellules H1155luc à des souris NOD/SCID. Des tumeurs se sont formées et nous y avons injecté un pARNi spécifique de la luciférase ou un pARNi de qualité in vivo non ciblant formulé dans du MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II. Au bout de 24 heures, nous avons injecté une solution de D-luciférine et avons soumis les animaux à une imagerie au moyen de l'instrument NightOWL II LB 983 de Berthold Technologies. Les animaux traités avec le pARNi spécifique de la luciférase ont montré une réduction significative de l'activité luciférase tandis que ceux traités avec le pARNi non ciblant étaient positifs pour la luminescence (Figure 1). Ces données démontrent l'efficacité des pARNi de qualité in vivo formulés dans "l'agent de délivrance" in vivo MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II.

Figure 1. Animal traité avec un pARNi spécifique de la luciférase à gauche ; animal traité avec un pARNi non ciblant à droite

Soixante-douze heures après l'injection, nous avons prélevé les tumeurs, puis nous avons extrait et normalisé les protéines au moyen d'un test de Bradford. Nous avons mesuré les concentrations en luciférase par dosage ELISA. Le graphique illustre la réduction de l'expression des protéines par rapport à un animal traité avec un agent ARNi non ciblant. L'activité luciférase a été divisée par deux dans les tumeurs (Figure 2).

Figure 2. Chaque réplicat représente une souris différente

Pour tout complément d'information, nous vous invitons à contacter nos services d'assistance technique à l'adresse oligotechserv@emdgroup.com.

MISSION est une marque de Merck KGaA Darmstadt (Allemagne) et/ou de ses filiales. Licence

Références

1. Stany MP, Vathipadiekal V, Ozbun L, Stone RL, Mok SC, Xue H, Kagami T, Wang Y, McAlpine JN, Bowtell D, et al. Identification of Novel Therapeutic Targets in Microdissected Clear Cell Ovarian Cancers. PLoS ONE. 6(7):e21121. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0021121

2. Beghin A, Belin S, Hage-Sleiman R, Brunet Manquat S, Goddard S, Tabone E, Jordheim LP, Treilleux I, Poupon M, Diaz J, et al. Correction: ADP Ribosylation Factor Like 2 (Arl2) Regulates Breast Tumor Aggressivity in Immunodeficient Mice. PLoS ONE. 4(11): https://doi.org/10.1371/annotation/b0d43779-c9aa-44fe-a46d-71d7d2bc4a6a

3. Ramachandran V, Arumugam T, Langley R, Hwang RF, Vivas-Mejia P, Sood AK, Lopez-Berestein G, Logsdon CD. The ADMR Receptor Mediates the Effects of Adrenomedullin on Pancreatic Cancer Cells and on Cells of the Tumor Microenvironment. PLoS ONE. 4(10):e7502. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0007502

4. Brahmamdam P, Watanabe E, Unsinger J, Chang KC, Schierding W, Hoekzema AS, Zhou TT, McDonough JS, Holemon H, Heidel JD, et al. 2009. TARGETED DELIVERY OF siRNA TO CELL DEATH PROTEINS IN SEPSIS. 32(2):131-139. https://doi.org/10.1097/shk.0b013e318194bcee

5. Fitamant J, Guenebeaud C, Coissieux M, Guix C, Treilleux I, Scoazec J, Bachelot T, Bernet A, Mehlen P. 2008. Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105(12):4850-4855. https://doi.org/10.1073/pnas.0709810105

6. Watabe M, Aoyama K, Nakaki T. 2008. A Dominant Role of GTRAP3-18 in Neuronal Glutathione Synthesis. Journal of Neuroscience. 28(38):9404-9413. https://doi.org/10.1523/jneurosci.3351-08.2008