HPLC Analysis of Amphetamines in Urine on Discovery® HS F5 after SPE using Discovery® DSC-MCAX and Standard C18
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
human urine spiked amphetamine and methylamphetamine at with 2 mg/mL
SPE tube/cartridge
Discovery DSC-MCAX, 100 mg/3mL (52783-U)
condition
DSC-MCAX SPE tube: 1 mL methanol; 1 mL 50 mM ammonium acetate, pH 6.0; C-18 SPE tube: 1 mL methanol; 1 mL DI water
sample addition
1 mL
washing
DSC-MCAX SPE tube: 1 mL 50 mM ammonium acetate, pH 6.0; 1 mL 1M acetic acid; 1mL methanol; C-18 SPE tube: 1 mL DI water; 1 mL 20% methanol
elution
DSC-MCAX SPE tube: 1 mL 5% ammonium hydroxide in methanol; C-18 SPE tube: 1 mL methanol
eluate post-treatment
evaporate to dryness with nitrogen at room temperature, reconstitute in mobile phase
column
Discovery HS F5, 15 cm x 4.6 mm I.D., 5 μm particles (567516-U)
mobile phase
[A] 10 mM ammonium acetate, pH 4.5: [B] methanol; (35:65, A:B)
flow rate
2 mL/min
column temp.
40 °C
detector
UV, 210 nm
injection
10 μL
Beschreibung
Anwendung
Vorbehandlung der Probe:
1 mL Urin (Mensch) wurde mit 2 μg/mL Amphetamin und Methylamphetamin versetzt. Die versetzte Probe wurd 1: 1 mit 50mM Ammonium
acetat, pH 6,0 verdünnt.
Konditionieren der DSC-MCAX SPE-Kartusche mit 1mL Methanol undanschließend mit 1 mL 50mM Ammoniumacetat, pH 6,0
Aufgabe von 1 mL der verdünnten versetzten Urinprobe
Waschen mit 1mL 50mM Ammoniumacetat, pH 6,0, 1mL 1M Essigsäure, und 1mL Methanol
Elutionmit 1 mL 5% NH4OH in Methanol
Eindampfen bis zur Trockne mit N2 bei Raumtemperatur
Aufnehmen in der mobilen LC-Phase
Konditionieren der DSC-18 SPE-Kartusche mit dem äquivalenten Bettgewicht/Dimension mit 1 mL Methanol und anschließend mit 1 mL DI H2O
Aufgabe von 1 mL der verdünnten versetzten Urinprobe
Waschen mit 1 mL DI H2O und 1 mL 20% Methanol
Eluieren mit 1 mL Methanol
Eindampfen bis zur Trockne mit N2 bei Raumtemperatur
Aufnehmen in der mobilen LC-Phase
Rechtliche Hinweise
Discovery is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany