Concentración de orina con filtros para centrífuga Amicon^® Ultra

La determinación precisa de proteínas específicas en la orina es importante para diagnosticar y controlar enfermedades. Sin embargo, la concentración de proteínas urinarias suele ser inferior al límite de detección de los análisis clínicos. Pueden utilizarse las unidades Amicon^®Ultra-4 ml 10 kDa MWCO para concentrar muestras de orina antes de los análisis clínicos de laboratorio.

Método

Enriquecimiento de cadenas ligeras de inmunoglobulina libres (proteínas de Bence-Jones) en muestras de orina utilizando filtros Amicon^® Ultra-4 ml 10 kDa MWCO.

1. Determinar la proteína total en una muestra de orina de 24 horas.
2. Llenar la unidad Amicon^® Ultra-4 ml con 4 ml de orina.
3. Centrifugar a 3400 x g durante 30–45 minutos (hasta obtener aproximadamente 25–50 μl de muestra concentrada). Esto representa un aumento de 160 veces de la concentración de la muestra original.
4. Introducir una punta de pipeta en la parte inferior de la unidad de filtración y retirar la muestra concentrada.
5. Realizar electroforesis en agarosa del concentrado para cuantificar las cadenas ligeras e identificar otras proteínas. Determinar el porcentaje de cadenas ligeras con respecto al número total de componentes en la orina. A continuación, multiplicar el porcentaje de cadenas ligeras por la concentración total de proteínas de 24 horas (gramos por volumen de 24 horas).
6. Realizar electroforesis con inmunofijación en el concentrado para identificar las cadenas ligeras.

Resultados de la resolución electroforética de cadenas ligeras de inmunoglobulina libres (proteínas de Bence-Jones) en muestras de orina concentradas utilizando unidades de concentración para centrífuga Centricon® (C) y Amicon® Ultra (A). Las bandas oscuras en ~25 kDa de cada carril representan estas proteínas.

Otras notas

1. También pueden verse inmunoglobulinas heterogéneas normales en el concentrado de orina con electroforesis con inmunofijación. Este “efecto escalera” se compone de cadenas ligeras microheterogéneas. Las proteínas de Bence-Jones pueden estar dentro de esta escalera. Para verificar la presencia de proteínas de Bence-Jones se requiere otro análisis mediante electroforesis bidimensional.
2. Si hay exceso de antígeno, se requerirá dilución del concentrado hasta que se logre el equilibrio entre el antígeno (proteína de Bence-Jones) y el anticuerpo.

Productos relacionados

1. Las unidades Amicon^® Ultra también pueden utilizarse para concentrar suero, plasma y líquido cefalorraquídeo para análisis similares. Se requiere una concentración de unos 20 mg/ml para detectar cadenas ligeras libres en los pacientes mediante electroforesis en agarosa. La detección por electroforesis con inmunofijación es 10 veces más sensible que por electroforesis de agarosa.
2. Se dispone también de concentradores estáticos (unidades Minicon^®) para la concentración de proteínas de Bence-Jones en la orina.

Reconocimientos

La investigación con unidades Amicon^® Ultra para la concentración de orina en este protocolo la realizó el Dr. Mark Merchant, en los Helena Laboratories, Beaumont, TX.

Referencias bibliográficas

1. N. T. Clinical Guide to Laboratory Tests, 2nd ed. Philadelphia: Saunders, WB; 1990;362–363..

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5. Christenson RH, Tucker JA, Allen E. 1985. Results of dipstick tests, visual inspection, microscopic examination of urine sediment, and microbiological cultures of urine compared for simplifying urinalysis.. 31(3):448-451. https://doi.org/10.1093/clinchem/31.3.448